با رعایت 10 عادت ساده روزانه میتوانید عمر طولانیتر و زندگی سالمتری داشته باشید. از تغذیه مناسب تا مدیریت استرس،...
ПЦР и Real-Time ПЦР: ключевые различия, применение и выбор метода
Всестороннее сравнение полимеразной цепной реакции (ПЦР) и полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР в реальном времени)
1. Введение
Обзор ПЦР
Полимеразная цепная реакция (ПЦР), изобретенная Кэри Муллисом, произвела революцию в молекулярной биологии. Этот метод является фундаментальным для амплификации in vitro определенных сегментов ДНК и играет решающую роль в генетических исследованиях, молекулярной диагностике заболеваний и многих других областях наук о жизни. Основная функция ПЦР заключается в получении очень большого количества копий определенного участка ДНК.
Введение в ПЦР в реальном времени (кПЦР)
Полимеразная цепная реакция в реальном времени (ПЦР в реальном времени), часто также называемая кПЦР или количественной ПЦР, представляет собой усовершенствованную форму ПЦР, которая позволяет отслеживать и количественно измерять амплификацию ДНК одновременно с протеканием реакции (т. е. в реальном времени) с использованием флуоресцентных сигналов. Эта особенность делает кПЦР мощным инструментом для количественных приложений, таких как анализ экспрессии генов и определение вирусной нагрузки.
В этой статье представлено всестороннее и подробное сравнение между обычной (или конечной) ПЦР и ПЦР в реальном времени (кПЦР). В связи с этим будут рассмотрены принципы, методология, стратегии обнаружения продуктов, возможности количественного определения, анализ данных, области применения, преимущества и недостатки, а также оборудование и расходные материалы, необходимые для обоих методов. Для большей ясности также будут объяснены связанные понятия, такие как ОТ-ПЦР и ОТ-кПЦР.
2. Обычная ПЦР: принципы и процесс
Фундаментальный принцип
Основной целью обычной ПЦР является экспоненциальная амплификация целевой последовательности ДНК, определяемой специфическими праймерами, посредством повторяющихся циклов температурных изменений. Этот метод в основном используется для получения больших количеств определенного фрагмента ДНК для последующего анализа.
Основные компоненты реакции
Для проведения реакции ПЦР необходимы следующие компоненты:
- Матричная ДНК (Template DNA): Образец ДНК, содержащий целевую последовательность, которую необходимо амплифицировать.
- Праймеры (Прямой и обратный): Короткие одноцепочечные последовательности ДНК (олигонуклеотиды, обычно длиной 20-25 нуклеотидов), комплементарные фланкирующим участкам целевой последовательности. Эти праймеры определяют фрагмент для амплификации и обеспечивают начальную точку (3'-ОН гидроксильную группу) для фермента полимеразы.
- ДНК-полимераза (DNA Polymerase): Термостабильный фермент (обычно Taq-полимераза, выделенная из бактерии Thermus aquaticus), который синтезирует новые цепи ДНК. Термостабильность этого фермента имеет решающее значение для выдерживания многократных высокотемпературных этапов денатурации.
- Дезоксинуклеозидтрифосфаты (dNTPs): Строительные блоки ДНК (включая dATP, dTTP, dCTP и dGTP), используемые полимеразой для построения новых цепей ДНК.
- Буфер (Buffer): Обеспечивает оптимальную химическую среду (pH и соответствующую концентрацию солей) для активности ДНК-полимеразы.
- Хлорид магния (MgCl2): Незаменимый кофактор для активности ДНК-полимеразы. Часто поставляется как часть буфера или мастер-микса.
- (Необязательно: Упоминание мастер-миксов) Готовые смеси (Master Mixes), содержащие полимеразу, dNTPs, буфер и MgCl2, широко используются для удобства и повышения воспроизводимости реакций.
Цикл ПЦР (термоциклирование)
Реакция ПЦР включает три повторяющихся этапа, контролируемых прибором, называемым термоциклером:
- Денатурация (Denaturation): Нагревание образца (например, до 95°C) для разделения двух цепей матричной ДНК и перевода их в одноцепочечное состояние.
- Отжиг (Annealing): Снижение температуры (например, до 55°C-65°C, в зависимости от температуры плавления или Tm праймеров) для связывания праймеров с их комплементарными последовательностями на одноцепочечной матричной ДНК. Температура плавления (Tm) праймеров является критическим фактором на этом этапе.
- Элонгация (Extension/Elongation): Повышение температуры (например, до 72°C, оптимальная температура для активности Taq-полимеразы) для синтеза ДНК-полимеразой новых цепей ДНК, начиная с праймеров.
- Повторение: Эти циклы повторяются 20-40 раз, что приводит к экспоненциальной амплификации (теоретически, удвоение продукта в каждом цикле) целевого фрагмента ДНК.
Обнаружение продукта (анализ по конечной точке)
В обычной ПЦР обнаружение продукта проводится после завершения термоциклирования.
- Электрофорез в геле (Gel Electrophoresis): Наиболее распространенный метод обнаружения продуктов ПЦР. Продукты ПЦР загружаются в агарозный гель, подвергаются воздействию электрического поля и разделяются по размеру. ДНК визуализируется под УФ-светом с использованием красителей, таких как бромистый этидий (EtBr) или более безопасных альтернатив (например, SYBR Safe, GelRed, DNA Safe Stain). Наличие полосы ожидаемого размера указывает на успешную амплификацию.
- Интерпретация результатов: Анализ геля подтверждает наличие или отсутствие и размер продукта. Интенсивность полосы может дать приблизительную, полуколичественную оценку количества продукта, но этот метод не очень надежен из-за эффекта плато. Наблюдение нескольких полос указывает на неспецифическую амплификацию или димеры праймеров.
Зависимость обычной ПЦР от детекции по конечной точке (обычно электрофорез в геле) является ее фундаментальным ограничением для количественного определения. Реакция ПЦР первоначально протекает экспоненциально, но в конечном итоге, из-за истощения компонентов реакции или ингибирования фермента, она входит в линейную фазу, а затем в фазу плато, где накопление продукта прекращается или замедляется. Различные реакции, даже с одинаковыми начальными количествами матрицы, могут достигать фазы плато на разных уровнях. Это делает конечное количество продукта плохим показателем начального количества матрицы. Таким образом, сравнение интенсивностей полос на геле в конечной точке дает, в лучшем случае, лишь полуколичественную оценку и часто ненадежно для точного определения начальных различий в количестве матрицы. Эта неопределенность и отсутствие прямой связи между конечным продуктом и начальным количеством матрицы создали потребность в методе, который мог бы измерять амплификацию во время предсказуемой экспоненциальной фазы, что привело к разработке кПЦР.
3. ПЦР в реальном времени (кПЦР): принципы и процесс
Фундаментальный принцип
кПЦР отслеживает амплификацию ДНК во время каждого цикла с использованием детекции флуоресценции. Увеличение интенсивности флуоресценции пропорционально количеству образовавшегося продукта ПЦР. Эта особенность обеспечивает возможность количественного определения.
Основные компоненты реакции
Компоненты кПЦР аналогичны обычной ПЦР (матричная ДНК, праймеры, полимераза, dNTPs, буфер, MgCl2) плюс химическое вещество для детекции флуоресценции.
Химические реагенты для детекции флуоресценции
В кПЦР используются два основных типа химических реагентов для детекции:
- ДНК-связывающие красители (например, SYBR Green):
- Механизм действия: Эти красители (например, SYBR Green I) излучают значительную флуоресценцию только при связывании с двуцепочечной ДНК (дцДНК). По мере накопления продукта дцДНК во время ПЦР интенсивность флуоресценции пропорционально возрастает.
- Преимущества: Более простой дизайн анализа (требуются только праймеры), более низкая стоимость и возможность проведения анализа кривой плавления после ПЦР для проверки специфичности продукта.
- Недостатки: Неспецифическое связывание – связывается с любой дцДНК, включая праймер-димеры и неспецифические продукты, что может привести к неточному количественному определению или ложноположительным результатам. Для подтверждения специфичности часто необходим анализ кривой плавления.
- Последовательность-специфические зонды (например, гидролизуемые зонды TaqMan®):
- Механизм действия: Олигонуклеотидные зонды, которые специфически связываются с целевой последовательностью между сайтами связывания прямого и обратного праймеров. Эти зонды помечены репортерным флуоресцентным красителем на одном конце (например, 5'-конце) и гасителем на другом конце (например, 3'-конце). Пока зонд не поврежден, гаситель подавляет флуоресценцию репортера (из-за близости). Во время фазы элонгации 5'→3' экзонуклеазная активность полимеразы разрушает связанный зонд, отделяя репортер от гасителя. Это разделение приводит к увеличению флуоресценции репортера. Флуоресценция генерируется только в том случае, если целевая последовательность амплифицируется, а зонд связывается с ней и впоследствии расщепляется.
- Преимущества: Высокая специфичность (сигнал генерируется только при амплификации целевого продукта), снижение ложноположительных результатов от неспецифических продуктов или праймер-димеров, возможность мультиплексирования (одновременное обнаружение нескольких мишеней в одной реакции с использованием зондов с разными репортерными красителями).
- Недостатки: Более сложный дизайн анализа (требуется синтез специфического зонда), более высокая стоимость.
- (Можно кратко упомянуть другие типы зондов, такие как Molecular Beacons или гибридизационные зонды, хотя TaqMan и SYBR Green являются наиболее распространенными).
Процесс кПЦР и сбор данных
Реакция кПЦР проводится в приборе для ПЦР в реальном времени (термоциклер для ПЦР в реальном времени), оснащенном оптической системой для возбуждения флуорофоров и детекции их излучения во время каждого цикла. Данные (интенсивность флуоресценции) собираются циклически.
Выходные данные: график амплификации и пороговый цикл (Ct/Cq)
- Описан типичный сигмоидальный график амплификации (флуоресценция в зависимости от номера цикла). Определены его фазы: базовая линия (ранние циклы, низкий сигнал/шум), экспоненциальная (логарифмически-линейная фаза, где флуоресценция увеличивается пропорционально продукту), линейная и плато.
- Порог (Threshold) определяется как произвольный уровень флуоресценции, установленный выше базового шума и в пределах экспоненциальной фазы.
- Ct (Cycle Threshold) или Cq (Quantification Cycle) определяется как (дробное) число циклов, при котором сигнал флуоресценции пересекает порог. Объясняется, что Ct/Cq является основной точкой данных, используемой для количественного определения.
- Объясняется обратная зависимость: меньшее значение Ct/Cq указывает на большее начальное количество целевой матрицы (амплификация пересекает порог раньше), тогда как большее значение Ct/Cq указывает на меньшее начальное количество.
Значение Ct/Cq является краеугольным камнем количественного определения в кПЦР. Однако это значение является относительным и зависит от настроек порога, эффективности реакции и прибора. Поэтому для получения значимых и воспроизводимых количественных результатов решающее значение имеет правильный дизайн эксперимента, включая контроли (например, гены «домашнего хозяйства» для относительного количественного определения или стандартные кривые для абсолютного количественного определения) и последовательные настройки анализа. Само по себе значение Ct не является абсолютной мерой, а точкой для сравнения. кПЦР измеряет флуоресценцию во время экспоненциальной фазы. Значение Ct/Cq — это цикл, в котором флуоресценция пересекает определенный порог в этой фазе. Это значение обратно пропорционально начальному количеству матрицы. Однако абсолютное значение Ct/Cq зависит от того, где проведена пороговая линия. Различное программное обеспечение или пользователи могут устанавливать немного разные пороги, что влияет на необработанное значение Ct. Кроме того, эффективность ПЦР (насколько близко к идеальному удвоению продукта происходит каждый цикл) влияет на то, как быстро достигается порог. Такие факторы, как ингибиторы или плохой дизайн праймеров, могут снизить эффективность и увеличить Ct/Cq. Поэтому прямое сравнение необработанных значений Ct/Cq между экспериментами или разными лабораториями без надлежащей нормализации (например, использования референсных генов, таких как GAPDH или бета-актин, для относительного количественного определения с помощью таких методов, как ΔΔCt) или калибровки (использования стандартных кривых с известными концентрациями для абсолютного количественного определения) может вводить в заблуждение. Это означает, что кПЦР, несмотря на свою мощность, требует тщательной настройки эксперимента, валидации и стратегий анализа данных (таких как ΔΔCt или стандартные кривые) для преобразования относительных значений Ct/Cq в биологически значимые количественные сравнения.
4. Объяснение ключевых различий
- Время и характер обнаружения: Обнаружение по конечной точке (после ПЦР, качественный снимок) по сравнению с обнаружением в реальном времени (во время ПЦР, кинетический мониторинг).
- Возможность количественного определения: Преимущественно качественная или полуколичественная (ПЦР) по сравнению с высококоличественной (кПЦР). Объясняется причина, по которой кПЦР позволяет проводить количественное определение (измерение в экспоненциальной фазе).
- Выходные данные и интерпретация: Изображение геля (полосы, размер, приблизительная интенсивность) (ПЦР) по сравнению с графиком амплификации, значениями Ct/Cq, анализом кривой плавления (необязательно для SYBR) (кПЦР).
- Чувствительность и специфичность: кПЦР обычно обеспечивает более высокую чувствительность (обнаружение меньшего числа копий) и, особенно с зондами, более высокую специфичность. Чувствительность обычной ПЦР может быть высокой, но она склонна к обнаружению неспецифических продуктов.
- Обработка после ПЦР: Необходима для ПЦР (электрофорез в геле), в то время как в кПЦР обычно исключается (система с закрытой пробиркой снижает риск манипуляций и контаминации).
В кПЦР выбор между SYBR Green и зондами представляет собой компромисс. SYBR Green дешевле и проще, но для определения специфичности требует анализа кривой плавления после реакции, поскольку он связывается с любой дцДНК. Зонды обеспечивают внутреннюю специфичность во время реакции и позволяют проводить мультиплексирование, но они дороже и требуют более сложного дизайна. Выбор зависит от потребности эксперимента в абсолютной специфичности во время реакции по сравнению со стоимостью и простотой. Если неспецифические продукты вызывают беспокойство или необходимо мультиплексирование, предпочтительны зонды, несмотря на более высокую стоимость. Если приоритетом является стоимость, а специфичность может быть подтверждена после реакции, подходящим вариантом является SYBR Green.
5. Сравнение областей применения
Применение обычной ПЦР
Основное внимание уделяется качественному или препаративному использованию:
- Обнаружение наличия/отсутствия (например, идентификация патогенов, базовая диагностика).
- Клонирование и субклонирование ДНК (амплификация фрагментов для вставки в векторы).
- Секвенирование (создание матрицы для реакций секвенирования).
- Генотипирование (например, обнаружение аллелей, скрининг трансгенных организмов).
- Сайт-направленный мутагенез (создание мутаций с помощью праймеров).
- ДНК-фингерпринтинг в криминалистике, установление отцовства.
- Анализ древней ДНК.
- Скрининг колоний.
Применение ПЦР в реальном времени (кПЦР)
Основное внимание уделяется количественному или высокочувствительному обнаружению:
- Анализ экспрессии генов (количественное определение уровней мРНК с помощью ОТ-кПЦР). Это одно из основных применений.
- Количественное определение вирусной нагрузки (например, ВИЧ, ВГВ, ВГС, SARS-CoV-2).
- Обнаружение и количественное определение патогенов (бактерий, вирусов, грибов, паразитов в клинических, пищевых, экологических образцах).
- Исследования рака (обнаружение мутаций, мониторинг минимальной остаточной болезни, фенотипирование рака).
- Генотипирование SNP и аллельная дискриминация.
- Анализ вариаций числа копий (CNV).
- Анализ микроРНК (miRNA).8
- Обнаружение генетически модифицированных организмов (ГМО).
- Анализ метилирования (например, метил-специфическая кПЦР).
- Количественное определение библиотек NGS.
- Валидация анализа / подтверждение результатов микрочипов.
Выбор области применения напрямую зависит от необходимости количественного определения. Если достаточно просто знать «Присутствует ли мишень?» или получить материал для последующего использования, обычной ПЦР часто бывает достаточно, и она дешевле. Если важно знать «Сколько мишени присутствует?» (например, экспрессия генов, вирусная нагрузка) или требуется более высокая чувствительность/специфичность для обнаружения (например, низкая нагрузка патогена, редкие аллели), кПЦР является предпочтительным или необходимым методом. Такие приложения, как клонирование или подготовка матрицы для секвенирования по Сэнгеру, требуют только достаточного количества правильного фрагмента ДНК, а не точного количественного определения исходного материала, что делает обычную ПЦР подходящей для этих целей.
6. Оборудование и расходные материалы
- Термоциклер:
- Обычная ПЦР: Требуется стандартный термоциклер (прибор для ПЦР) для выполнения запрограммированных температурных циклов.
- ПЦР в реальном времени: Требуется система для ПЦР в реальном времени (прибор для кПЦР), которая представляет собой термоциклер с интегрированным оптическим модулем (источник света, фильтры, детектор) для измерения флуоресценции в каждой лунке во время циклов.
- Расходные материалы (пластик):
- Обычная ПЦР: Используются стандартные ПЦР-пробирки (0,2 мл или 0,5 мл), стрипы или 96/384-луночные планшеты из полипропилена. Прозрачность часто предпочтительна для визуального подтверждения работы с жидкостями.
- ПЦР в реальном времени: Требуются оптические пробирки, стрипы или планшеты. Они предназначены для обеспечения эффективного возбуждения и детекции флуоресценции. Часто изготавливаются из белого или матового пластика для максимизации отражения сигнала и минимизации фона/перекрестных помех между лунками, или прозрачного для конкретных приборов/химических реагентов. Крышки планшетов также должны быть оптически прозрачными.42 Однородность и качество имеют решающее значение для получения стабильных результатов.
- Реагенты:
- Обычная ПЦР: Матричная ДНК, праймеры, dNTPs, буфер, MgCl2, термостабильная полимераза (например, Taq). Распространены мастер-миксы.
- ПЦР в реальном времени: Все реагенты для обычной ПЦР плюс флуоресцентный краситель (например, SYBR Green) или последовательность-специфические зонды (например, TaqMan). Часто используются специализированные мастер-миксы, содержащие флуоресцентный химический реагент и иногда оптимизированные полимеразы (например, Taq с «горячим стартом» для повышения специфичности). Может включать пассивный референсный краситель (например, ROX) для нормализации сигнала в некоторых системах.
- Другое оборудование (общее для обоих, но необходимое): Пипетки (с регулируемым объемом, многоканальные), наконечники для пипеток (рекомендуются фильтрующие наконечники для предотвращения контаминации), микроцентрифуга, вортекс-миксер, потенциально аппарат для электрофореза в геле (источник питания, камера для геля, УФ-трансиллюминатор — особенно для обычной ПЦР), компьютер для анализа (особенно кПЦР).
Фундаментальное различие в оборудовании (стандартный термоциклер по сравнению с термоциклером для ПЦР в реальном времени с оптикой) напрямую определяет тип получаемых данных. Без оптической системы детекции мониторинг и количественное определение в реальном времени невозможны, что ограничивает стандартную ПЦР анализом по конечной точке. Необходимость оптической совместимости также приводит к требованию использования специфических и часто более дорогих пластиковых расходных материалов в кПЦР. Включение оптики и связанного с ней программного обеспечения для анализа данных в реальном времени делает приборы для кПЦР значительно более сложными и дорогостоящими, чем стандартные термоциклеры.
7. Преимущества и недостатки
Понимание сильных и слабых сторон каждого метода имеет решающее значение для выбора подходящего метода для исследовательского или диагностического применения. В таблице ниже обобщены эти моменты:
Характеристика | Обычная ПЦР (конечная точка) | ПЦР в реальном времени (кПЦР) |
---|---|---|
Основная цель | Амплификация для обнаружения/последующего использования | Количественное определение и обнаружение в реальном времени |
Время обнаружения | Конец реакции (конечная точка) | Во время реакции (в реальном времени) |
Количественное определение | Качественное / полуколичественное (ограниченная надежность) | Количественное (высокая точность и широкий динамический диапазон) |
Чувствительность | Высокая, но может обнаруживать неспецифические продукты | Обычно выше, особенно для малого числа копий |
Специфичность | Ниже (зависит от связывания праймеров и размера в геле) | Выше (особенно с зондами) |
Скорость (время до результата) | Дольше (ПЦР + анализ после ПЦР) | Быстрее (нет необходимости в обработке после ПЦР) |
Риск контаминации | Выше (манипуляции после ПЦР, например, открытие пробирок для геля) | Ниже (система с закрытой пробиркой) |
Стоимость (оборудование и реагенты) | Ниже | Выше |
Сложность | Более простая настройка и анализ | Более сложная (дизайн анализа, анализ данных, требуются специальные знания) |
Пропускная способность | Может быть высокой (стандартные планшеты), но анализ является узким местом | Может быть высокой (формат планшета), анализ интегрирован, но производительность прибора может быть ограничивающей |
Гибкость (после ПЦР) | Продукт доступен для клонирования, секвенирования и т. д. | Продукт обычно не используется для последующих применений (закрытая система) |
Обычная ПЦР, несмотря на более низкую стоимость и большую простоту, сталкивается с такими ограничениями, как риск контаминации из-за необходимости манипуляций с продуктом после реакции (например, открытие пробирок для электрофореза в геле). В отличие от этого, кПЦР, устраняя этапы после ПЦР, увеличивает скорость получения результатов и снижает риск контаминации. Более высокая стоимость оборудования и реагентов для кПЦР является ограничивающим фактором.
Хотя обычная ПЦР когда-то была революционной и считалась «золотым стандартом» для обнаружения1, кПЦР (и ОТ-кПЦР) в значительной степени заменила ее для приложений, требующих количественного определения, высокой чувствительности или быстрого обнаружения, став новым «инструментом выбора» или «золотым стандартом» во многих из этих конкретных областей (например, вирусная нагрузка, экспрессия генов, чувствительное обнаружение патогенов). Это представляет собой технологическую эволюцию, обусловленную потребностью в более точном и эффективном молекулярном анализе.
8. Заключение
Резюме основных различий
Фундаментальные различия между обычной ПЦР и ПЦР в реальном времени заключаются во времени и методе обнаружения продукта, возможности количественного определения, методе обнаружения (гель по сравнению с флуоресценцией) и его последствиях для обработки после ПЦР и риска контаминации. Обычная ПЦР — это метод конечной точки, в основном используемый для качественного или полуколичественного обнаружения и амплификации ДНК для последующих применений. В отличие от этого, ПЦR в реальном времени позволяет отслеживать амплификацию ДНК в режиме реального времени, обеспечивая точный количественный анализ.
Выбор правильного метода
Выбор между обычной ПЦР и кПЦР полностью зависит от экспериментального вопроса и его требований. Для базовой диагностики, клонирования или подготовки матрицы для секвенирования, где интересует только наличие или отсутствие или получение достаточного количества продукта, обычная ПЦР является экономически эффективным и адекватным методом. Однако для приложений, требующих точного количественного определения (например, анализ экспрессии генов, определение вирусной нагрузки), очень высокой чувствительности (например, обнаружение патогенов с низким числом копий или редких аллелей) или быстрого обнаружения, кПЦР является предпочтительным, а иногда и единственным возможным вариантом.
Взгляд в будущее
Технологии ПЦР продолжают развиваться. Например, цифровая ПЦР (цПЦР) появилась как метод с еще более высокой точностью количественного определения. Эти достижения демонстрируют динамизм области молекулярной биологии и постоянные усилия по разработке более точных и эффективных инструментов для исследований и диагностики. Правильное понимание различий и возможностей обычной ПЦР и ПЦР в реальном времени позволяет исследователям и клиницистам выбирать наиболее подходящий метод для достижения своих целей.
Применение ПЦР и ПЦР в реальном времени в контроле качества меда и пчеловодстве
Определение подлинности меда с помощью молекулярных методов
Методы ПЦР и кПЦР находят ценное применение в пчеловодстве и контроле качества меда:
- Идентификация ботанического происхождения меда (молекулярная мелиссопалинология):
С помощью специфической ПЦР можно идентифицировать ДНК растений, присутствующих в меде, и определить происхождение цветов, используемых пчелами. Этот метод используется для подтверждения монофлорных медов (таких как астрагаловый или акациевый мед).
- Обнаружение фальсификации меда:
ПЦР в реальном времени может обнаруживать несанкционированные добавки, такие как кукурузный сироп с высоким содержанием фруктозы (HFCS), даже в небольших количествах (менее 5%).
- Идентификация видов медоносных пчел:
Метод ПЦР-ПДРФ используется для дифференциации различных пород медоносных пчел (таких как Apis mellifera по сравнению с Apis cerana).
- Обнаружение болезней медоносных пчел:
Количественная кПЦР используется для идентификации и измерения нагрузки вирусов, таких как вирус деформации крыла (DWV) или Nosema (патогенный гриб), в пчелиных семьях.
- Отслеживание антибиотиков и загрязнителей:
Путем разработки специфических праймеров можно обнаружить остатки запрещенных антибиотиков (таких как тетрациклин) в меде.
Почему эти методы важны для медовой промышленности?
Преимущества использования ПЦР/кПЦР в контроле качества меда:
- Высокая чувствительность (обнаружение очень малых количеств загрязнителей)
- Исключительная специфичность (точное обнаружение видов растений/микробов)
- Высокая скорость (результаты через несколько часов)
- Точная возможность количественного определения (например, для измерения вирусной нагрузки)
В передовых лабораториях по контролю качества меда ПЦР в реальном времени принята в качестве золотого стандарта для многих анализов, таких как выявление фальсификаций и диагностика болезней медоносных пчел.
Оставить комментарий
Войдите, чтобы оставлять комментарии
Связанные посты


Последние комментарии